科普课堂 | 超详细！松材线虫形态识别与鉴定发表时间：2024-06-11 17:09 松材线虫是一种肉眼看不见的病原线虫，它是造成我国松林大面积死亡的检疫性有害生物，今天的科普课堂生兴防治就为大家详细讲解松材线虫的形态学识别鉴定。 形态鉴定目标： 找到松材线虫的雌、雄虫 松树体内寄生着40余种线虫，只有松材线虫会造成松树的死亡，因此我们需要在众多线虫中区分出松材线虫雌雄成虫。
（从松木样本中分离出的线虫溶液在显微镜下呈现的状态，我们可以看到大小不一的线虫） 为了方便观察松材线虫成虫特征，一般我们会将线虫热杀死。 热杀死的松材线虫形态：
（热杀死后，雌成虫一般呈现大C状，雄成虫呈现J状，体长约1毫米） 下面我们再来看一下松材线虫雌雄成虫头部的共同特征。 雌、雄虫头部特征：
（唇区高，缢缩明显；口针细长，基部略增厚；中食道球卵圆形,占体宽的2/3以上，瓣门清晰） 接下来我们分别来看下雌雄成虫的局部特征，雌雄成虫显著区别在于其尾部特征。 雄成虫尾部特征：
（尾端尖细，呈爪状，端生短卵状交合伞包裹。交合刺大，弓形，成对，喙突锐尖，远端有清晰的盘状膨大突起） 雌成虫尾部特征：
（尾部亚圆筒状，末端宽圆，无尾尖突，或末端有尾尖突，但不超过2μm）
（另外，雌成虫阴门位于约于虫体后部四分之三处，被后伸、宽的阴门盖所覆盖。） 以上就是松材线虫主要的形态特征，大家可以根据以上特征进行显微镜下的形态识别。 形态学鉴定的过程中，人们发现了一种拟松材线虫与松材线虫极为相似，因此，松材线虫形态鉴定的难点是区分出拟松材线虫。 雌虫区别：看尾尖突长短 松材线虫雌虫尾部近圆筒形，末端宽圆，无尾尖突或有一尾尖突，其长度一般不超2μm； 拟松材线虫尾部亚圆锥形,尾端指状,有一明显的尾尖突,其长度一般超过3.5μm。 雄虫区别：看交合伞 松材线虫雄虫的交合伞呈卵圆形，拟松材线虫雄虫的交合伞呈平截形。
以上区别需在高倍显微镜下较细致的进行观察识别 随着松材线虫不断繁衍变化，专家们发现多种不同尾部的松材线虫，经侵染性试验和基因鉴定都是松材线虫，这也增加了松材线虫的显微镜鉴定难度。
为了能更快速、准确的识别出松材线虫，2009年南京林业大学和南京生兴防治联合研发的松材线虫自动化分子检测鉴定技术，实现松材线虫病分子检测技术在我国各省市县的推广和普及化，依靠该检测技术，结合形态学方法，基本解决了我国松材线虫病检疫和监测过程中的鉴定技术难题。
在该技术研究中，南京林业大学陈凤毛教授等以松材线虫的rDNA内部转录区为靶标，设计了一对实时荧光定量PCR引物和特异探针，构建了松材线虫实时荧光定量PCR检测方法。特异引物与探针能够较好地区分来自枯死松树体内的松材线虫、拟松材线虫、大核滑刃线虫、霍夫曼尼伞滑刃线虫和长尾属Seinura线虫。在10μL的反应体系中，能够检测出0.005pg的物种DNA含量。实时荧光定量PCR技术凭借其高灵敏度、高准确性和快速性等优点，已成为松材线虫分子检测鉴定主流方法，堪称DNA检测的金标准。 参考文献： [1] 顾建锋，方亦午，马欣欣，等.松材线虫检测鉴定技术研究进展[J].植物检疫，2023，37(1): 1-6. [2] 刘伟，杨宝君.松材线虫和拟松材线虫雄虫交合伞形状的比较[J].林业科学研究，1995，8(2): 223-225. [3] 黄任娥.感染松材线虫病松树滑刃目线虫研究[D].南京：南京林业大学，2007. [4] 陈风毛，叶建仁，汤坚，等.应用PCR-RFLP技术鉴别松材线虫与拟松材线虫[J].南京林业大学学报，2006，30(4):5-8. |
