关于松材线虫分子检测技术的选择

20世纪末期，RFLP、RAPD、SCAR等技术，对推动松材线虫种类鉴定起到了积极作用，但由于这些技术存在复杂性、重复性、操作程序和检测时间等问题，没有真正在生产实际上广泛应用。

2006年，我国研发出的松材线虫分子检测技术成功应用于生产实践，并在全国推广应用。尤其是2009年南京林业大学和南京生兴联合研发的松材线虫自动化分子检测鉴定技术，实现了松材线虫病分子检测技术的广泛普及。依靠该检测技术，结合形态学方法，基本解决了我国松材线虫病检疫和监测过程中的鉴定技术难题。

松材线虫自动化分子检测鉴定技术原理

在该技术研究中，陈凤毛等以松材线虫的rDNA内部转录区为靶标，设计了一对实时荧光定量PCR引物和特异探针，构建了松材线虫实时荧光定量PCR检测方法。实时荧光定量PCR技术具有特异性好、灵敏度高、速度快等优势，其发展时间长，成熟度高，是现阶段分子诊断主流技术平台。

松材线虫实时荧光定量PCR检测

该方法中，特异引物组合F11/Ｒ11与探针TaqMan－11 能够较好地区分来自枯死松树体内的松材线虫、拟松材线虫、大核滑刃线虫、霍夫曼尼伞滑刃线虫和长尾属Seinura线虫，且在10μL反应体系中能够检测出0.005 pg的DNA含量。

生兴防治基于该项技术研发的松材线虫自动化分子检测系统‍‍，操作简单，检测快速，系统自动完成判读，为松材线虫病快速检疫技术的推广应用提供了产品支撑。

参考文献：

[1] 李敏,叶建仁,陈凤毛.松材线虫检测技术研究进展[J].中国森林病虫,2022,41(03):52-58. DOI:10.19688/j.cnki.issn1671-0886.20220043.

[2] GB/T 35342-2017松材线虫分子检测鉴定技术规程